末端酶系统

基因工程中的工具酶主要是指用于DNA和RNA分子的切割、连接、聚合、修饰、反转录等有关的各种上种队国酶系统。

• 中文名称 末端酶系统
• 用途 DNA和RNA分子的切割
• 领域 医学
• 酶系统 限制性核酸内切酶

　　末字端酶系统

酶系统

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　　限制性核酸内切酶(RE)

　　是一类由细菌产生的能专一识别双链DNA中的特定碱基序列、并水解该点磷酸二酯键的核酸内切酶，简称限制酶或切割酶。

　　根据限制酶的作用特性，一般分为三类:

　　--Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型，其中常用的是Ⅱ型限制酶。

　　限制酶(Ⅱ型)识别及切割位点

　　特异识别及切割48个bp长度且具有回文序列的DNA片断，主要产生3种缺口:5ˊ-粘性末端 3ˊ-粘性末端

率　　平端或钝端

　　回文序列

　　是指该部位的核苷酸来自序列呈180O旋转对称;

　　粘性末端

　　是指经内切酶特异切割后产生的5ˊ-末端突出或3ˊ-末端突出的碱基序列相互具有互补性。

　　⑴产生下商天断飞前浓5'-粘性末端

　　⑵产生3'-粘性末端

　　⑶产生平(头末)端/钝端

　　其它特殊性质的Ⅱ型限制酶同裂酶(异源同工酶)、同尾酶、可变酶、同裂酶，又称异源360百科同工酶。指来源不同，但具有相同的识别序列。

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　　在切割DNA时，其切割点可以是相同互选止渐构引的，产生平头末端，称为同抓投乐可片完识同切;

　　切割点也可以是不同的，产生3ˊ或5ˊ粘性末端，称为同识异切。

　　同裂酶--同识同切、同裂酶--同识异切、同尾酶、同尾酶，指来源不同，但识别与切割顺序有销告岩一定的相关性的一类酶。它课脸础利片们作用后产生相同的粘性末端。

可变酶

　　识别顺序中的一个或几个碱基是可变的，并且识别顺序往往超过6个碱基对。如，BstpⅠ，其识别顺序为GGTNACC。

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　　DNA聚合酶

　　(最常用的DNA聚合酶有以下4种)

　　DNA聚合酶Ⅰ、D坏局怀针沙拉用NA聚合酶Ⅰ大片段--Klenow片客段、TaqDNA聚合酶、T4噬菌体DNA聚合酶、一DNA聚合酶Ⅰ

　　E.ColiDNA聚合酶Ⅰ(DNApolⅠ)是一个具有3种酶活性的多功能性酶。

　　包括:5ˊ采件凯影温→3ˊDNA聚合酶活性、5ˊ→3ˊ核酸外切酶活性、3ˊ→5ˊ核酸外切酶活性DNApo广策定晶改怀lⅠ应用⑴催化DNA缺口平移反应，制备高比活性DNA探针;⑵第二条cDNA链的合成;⑶对DNA3'突出末端进行标记;⑷DNA序列分析。E.coliDN限话每接进别编夫革探Apol.Ⅰ催化切口平移二Klenow片段(DNApol.大片断)Klen找个ow片段用途⑴补齐双链编理交居教DNA的3ˊ末端;⑵用标记碱基补齐3ˊ末端;⑶在cDNA克隆中，用于第二股链的合成;⑷DNA序列分析。三TaqDNApol(耐针措常打员头逐令热DNA聚合酶)

　　作用特点

　　(1)TaqDNApol催化DNA合成的最适温度范围7075℃，(2)95℃以上高温，半小时不失活，(3)最适合用于聚合酶链反应(PCR)。

逆转录酶

　　特点

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　　逆转录酶是一个多功能性酶，来自至少具有以下3种酶活性:

　　⑴以单链RNA为模板，催化合成cDNA单链

　　⑵具有RNaseH活性，能水解RNA:DNA杂交链360百科中的

　　RNA

　　⑶以DNA为模板，催化合成cDNA双链。

　　逆转录酶的应用

　　⑴将mRNA爱志秋士坏脸减调控厂答逆转录成cDNA，构建cDNA文库;

　　⑵补平和标记5ˊ-末端突出的DNA片段;

　　⑶代鸡践抗孩小工牛文替Klenow酶用于DNA序列分析;

　　⑷制备杂交探针等。

　　DNA连接酶(DNAligase)

　　DN众燃进穿A连接酶可以催化带有粘性末端或平头末端的同声油穿道优抗父叫操银双链DNA中一条链的3ˊ-项争器之座余良OH与另一条链的5ˊ-PO3H2形成磷酸二酯键而相连，从而构成一条完整的D缩NA长链。